Optimización de los métodos de fijación para el análisis de imágenes del hepatopáncreas en camarones patiblancos, Penaeus vannamei (Boone)

Resumen:

La patología en los camarones peneidos se basa en la histología, que es subjetiva, requiere mucho tiempo y es difícil de clasificar de manera reproducible. El análisis de imágenes automatizado es más rápido, objetivo y adecuado para el cribado de rutina; sin embargo, requiere protocolos estandarizados. El primer paso crítico es la fijación adecuada del tejido diana. El protocolo de fijación de Bell & Lightner (A Handbook of Normal Penaeid Shrimp Histology, 1988, The World Aquaculture Society, Baton Rouge), ampliamente utilizado para la histología de rutina de secciones de parafina, no está optimizado para el análisis de imágenes, y no se describe ningún protocolo para secciones congeladas en la literatura disponible. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue optimizar la fijación del hepatopáncreas (HP) del camarón patiblanco (Penaeus vannamei) tanto para secciones en parafina como congeladas utilizando un sistema de puntuación semicuantitativo. Para las secciones de parafina, se compararon cuatro volúmenes de inyección y tres métodos de inyección, para las secciones congeladas, cuatro métodos de congelación y cuatro métodos de fijación. Para las secciones de parafina, se logró una fijación óptima aumentando tres veces el volumen de fijación recomendado por Bell y Lightner, del 10% al 30% del peso corporal del camarón, combinado con una sola inyección en el HP. La fijación óptima de las secciones congeladas se logró congelando el cefalotórax con nitrógeno líquido, seguido de la fijación de la sección con isopropanol al 60%. Estos métodos optimizados permiten el uso futuro del análisis de imágenes y mejoran la histología clásica.